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文献标题: CCL20基因修饰人角质形成细胞的克隆筛选及相关干细胞转录因子的研究
文献来源: 王勇  第三军医大学  2009年
文献关键词: CCL20基因打靶RNA干扰人角质形成细胞干细胞转录因子
文献摘要: 减轻同种异体皮肤排斥反应、延长烧伤创面移植物的存活时间是大面积烧伤治疗亟待解决的关键问题之一。郎格罕斯细胞(LC)是引起异基因皮肤移植排斥反应的启动细胞。CCL20主要由活化的角质形成细胞产生,是诱导CD34+造血干细胞来源的LC前体向表皮迁移的强有力的趋化因子。抑制CCL20基因在角质形成细胞的表达可以减少受者的LC向异基因组织工程皮肤内迁移,削弱间接抗原提呈途径,从而减轻受者对皮肤移植物的排斥反应。人永生化角质形成细胞系(HaCaT)不仅具有与表皮干细胞相似的表型、增殖和分化特性,而且其遗传特性稳定、不具有成瘤性,可作为组织工程皮肤种子细胞的理想候选者。若能对HaCaT的CCL20基因进行长期稳定的修饰(敲除或干扰),则可能达到改良组织工程皮肤种子细胞的目的。因此,本研究拟构建CCL20基因敲除的置换型打靶载体,将打靶载体DNA与人角质形成细胞DNA进行同源重组,克隆筛选后进行鉴定及打靶载体转染方法的探索,并检测干细胞相关的转录因子在HaCaT及基因敲低型细胞克隆内mRNA的表达及蛋白水平的变化,为CCL20基因修饰的低排斥反应的组织工程皮肤表皮种子细胞的筛选提供新的理论基础。 目的 1.构建CCL20基因敲除的置换型打靶载体ploxP-hCCL20,将打靶载体DNA与人角质形成细胞DNA进行同
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