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文献标题: 破骨细胞钠氢转运蛋白关键位点研究
文献来源: 黄晓斌;仲蕾蕾;  第三军医大学学报  2012年  13期
文献关键词: 破骨细胞钠氢转运蛋白2酿酒酵母
文献摘要: 目的在酿酒酵母中异源表达人破骨细胞分化成熟潜在因子钠氢转运蛋白2,对其关键氨基酸保守位点进行突变分析,鉴定其作为盐离子载体转运Na+的功能。方法采用突变试剂盒依次把此蛋白的D278和D279 2个位点的天冬氨酸中1个氨基酸突变成半胱氨酸,得到2个不同位点突变的定点突变体;构建酵母双基因表达载体,通过电穿孔的方式转入到酵母菌株中;Western印迹检测2个定点突变基因在酵母菌株的表达;通过NaCl选择压力显示2个突变体在高盐环境中的相互作用,观察菌株的抗盐生长表型。结果成功获得适合转化酵母的多个载体;在固体和液体培养基中,经半乳糖诱导后,各个载体均可使酵母异源表达钠氢转运蛋白2;生长曲线显示2个突变体可相互作用,部分恢复酵母菌株的抗盐能力。结论钠氢转运蛋白2通过关键位点D278和D279 2,以形成二聚体的方式在细胞中发挥着钠离子转运功能。
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