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文献标题: 气相色谱/质谱法检测壬基酚在大鼠睾丸支持细胞中的分布
文献来源: 潘旭萍;高子燊;于红霞;韩晓冬;  南京大学学报(自然科学)  2010年  02期
文献关键词: 卵泡刺激素受体免疫荧光壬基酚高效气相色谱及质谱支持细胞细胞质膜分离方法
文献摘要: 壬基酚(NP)是一种环境内分泌干扰物,具有类雌激素作用,它的高稳定性和脂溶性的特点使其能够在有机体,特别是脂肪组织内聚集,对人类的生殖系统产生毒害作用,因其分子结构与细胞膜的磷脂分子很相似,故与磷脂分子有很高的亲和力.为了探讨NP对生殖细胞的毒理机制,了解其在细胞内的分布情况,建立大鼠睾丸支持细胞NP含量的高效气相色谱及质谱(即GC/MS)检测方法,观察NP在细胞中的分布.实验采用原代培养的大鼠睾丸支持细胞,通过带有CY3标记的抗体对其质膜上特异表达的卵泡刺激素受体(FSHR)进行免疫荧光染色,鉴定支持细胞.然后用10μmol/L和20μmol/L的NP分别作用细胞3 h6、h1、2 h2、4 h后,超声破碎,并对10μmol/L NP处理的样品用改进的三步离心法进行细胞质膜分离,GC/MS方法检测NP在细胞中的总含量,以及细胞膜中NP含量占细胞中的总含量的比例.结果显示培养的细胞均呈现绿色荧光,都表达FSHR.两步离心的质膜分离方法,膜纯度为33.22%,改进的三步离心法膜纯度为78.60%.另外,分别在10μmol/L和20μmol/L NP浓度下,随着作用时间的延长,NP在细胞中的总含量逐渐增加至12 h,在24 h时突然下降至3 h的水平.细胞膜中NP含量占细胞中的总含量的比例,随着作用时间的延长而降低.由此得出结论是:FSHR可以作为大鼠睾丸支持细胞的?
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